为什么做EMSA


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为什么要做EMSA实验,EMSA有什么用。

  • EMSA(Electronic Mobility Shift Assay) 是测定核酸(RNA/RNA)结合蛋白与目标分子结合活性的一种传统技术。EMSA应用最多的是测定与双链DNA特定序列结合的结合(查看EMSA工作原理)。 

  • 细胞转录因子参与基因的调节与控制,与生物体的生老病死都有关系。正常细胞有正常的转录因子活性,疾病时就出现异常。差不多每种癌症细胞都有异常的转录因子结合。例如儿童淋巴性白血病大部分都有异常活化的NFkB。头颈部肿瘤异常活化的STAT3很常见。

  • 近年火热的干细胞与诱导性干细胞技术都涉及到转录因子的作用:诱导体细胞向干细胞转化的几种基因与基因产物全部都是转录因子。STAT5 EMSA

  • EMSA结合了电泳技术,能够对发生结合的转录因子进行确认。相对而言,其它任何没有结合电泳分离技术的测定方法,如基因(核酸)芯片,蛋白芯片,微孔板法转录因子结合测定,ChiP筛选测出的活化转录因子,都需要用EMSA进行确认。如右图所示,EMSA测定中出现了6-7条带。在EMSA测定中,第1与第3电泳道是STAT5阴性,但在生物芯片点阵或微孔板测定中,都会出现阳性信号。

  • EMSA是确认核酸结合蛋白活性的金指标,在可预见的相当时间内,EMSA都是对TF活性进行确认的不可替代的技术。

  • 结合抗体的Super Shift EMSA是对多聚合体的成分进行鉴定。EMSA结合报告基因的测定能够确认所涉及到的基因调节控制。</5>

  • EMSA测定的转录因子活性是细胞信号传导通路的重要环节,任何信号传导都会与转录因子激活连接并且启动转录过程。信号通路中的分子磷酸化有时并没有EMSA可检测的核内转录因子,后来用免疫荧光证明核内根本没有NFkB的核转运。

  • 随着测定技术的改进,非放射性EMSA能够比放射性同位素标记的方法(要4-5天出结果)更快出结果,而且比大多数信号传导通路分子的分析方式更快出结果。利用微奥基因的产品与技术(查看相关技术与产品),EMSA测定最快可以在2-2.5小时完成(查看),灵敏度也超过用放射性同位素标记的方法。

 
 

 

EMSA/Pulldown

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