微奥基因的基于化学发光的非放射性EMSA试剂与技术服务,已得到越来越多用户的认可。微奥基因公司的科学家并持续对产品进行改进以期提供更多高效、快速、价低的实验试剂。 在对比各种EMSA测定方法中,我们发现基于地高辛标记法的EMSA测定灵敏度低,操作繁琐,耗时,我们决定不做与地高辛标记有关的任何产品开发。另一方面,我们发现用近红外荧光分子标记的探针做EMSA测定,效果不错,但存在探针在国内不易获得,探针容易产生聚集等问题。为此,我们开发了基于近红外荧光的EMSA试剂,并解决荧光探针标记等问题。微奥基因现在能够对每一种转录因子的EMSA测定提供三种不同测定方法的试剂供客户选择。下表列出每种测定方法的优缺点及所需的仪器设备。在表下面,我们用示意图解释了每种测定方法的大致步骤及所需要的时间。请有需要的客户结合各自的情况选用适当的试剂,有任何疑问,请与我们联系。
1. 三种测定方法的比较
探针直染EMSA | 近红荧光探针EMSA | 生物素探针EMSA | |
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产品名 | gsEMSA-FK | irEMSA-FK | biEMSA-FK |
目录号 | gs+TF序列号 | ir+TF序列号 | bi+TF序列号 |
所需探针 | 非标记探针 | 近红荧光标记探针 | 生物素标记探针 |
Poly[dI:dC] | 不允许使用 | 一般都用 | 一般都用 |
凝胶电泳时间 | 1小时左右 | 1小时左右 | 1.5小时左右 |
必需仪器设备 | 电泳装置,成像仪或扫描仪。 | 电泳装置,荧光成像仪或扫描仪,推荐美国Li-Cor的近红外扫描仪。 | 电泳装置,DNA紫外交联仪,X光胶片冲印设备或化学发光成像仪。 |
测定灵敏度 | 低 | 高 | 高 |
所需时间 | 2小时 | 2.5小时 | 5-6小时 |
DNA染液 | 需要 | - | - |
核蛋白用量 | 15-25ug | 2-5ug | 2-5ug |
适用样品 | 仅用于纯化蛋白 | 粗制样品或纯化蛋白均可 | 粗制样品或纯化蛋白均可 |
2. 三种测定方法的原理与主要步骤。
ECL/Biotin EMSA
IR (近红外荧光)EMSA
探针直染EMSA