RNA与生命息息相关：mRNA是直接指导蛋白质生物合成的模板，参与基因表达中的信息传递过程。近来的研究发现即使不参与蛋白编码的RNA（ncRNA)也在积极发挥基因调节作用。ncRNA包括许多类型；包括小分子的miRNA与piRNA（Piwi相互作用RNA）与长分子的非编码RNA（lncRNA）与环形RNA（circRNA）。

从检测技术上讲，检测长链RNA与小分子RNA没有本质不同，都是基于靶分子与探针的杂交。但检测小分子RNA的试剂有其独特性，我们另做专章介绍。此处涉及到的RNA检测适用于长度大于100nt的RNA，如mRNA、lncRNA或circRNA等的检测。

 现已有多种检测长链RNA的技术，包括用放射性标记的探针进行 RNA 印迹分析（Northern blotting），基于微阵列[12]和基于聚合酶链式反应(PCR)的方法[13]，液相单细胞测定[14]，原位杂交[15-16]和高通量测序[17]等。然而，这些方法都有其固有的局限性。

Northern印迹法曾经是检测RNA的标准方法，可以检测RNA的相对分子大小和丰度，但存在低通量、耗时长、易降解，敏感度较低等缺点，现在已较少应用。

 实时定量PCR(quantitative real-time PCR，qRT-PCR)具有动态范围大、灵敏度高、序列特异性强等优点，已成为检测miRNA表达的常规和可靠技术。 但qRT-PCR测定的RNA并非样品的实际表达量，难于区分RNA的单核苷酸突变，并且还有假阳性等问题。

 微阵列技术是一种快速、高通量检测RNAs的方法，但成本高、灵敏度低、对序列相似的RNA分辨差，也有假阳性问题。

 一些学者开发了各种等温分析技术，包括滚环扩增（RCA），指数扩增反应（EXPAR），环介导的等温扩增（LAMP），杂交链反应和催化发夹组装。尽管这些测定具有简单甚至无需仪器操作的优点，但也存在限制其广泛应用的缺点，例如EXPAR和LAMP的非特异性扩增和高背景信号，以及杂交链反应和催化发夹组装的相对较慢的动力学和低灵敏低。

微奥基因（viagene）公司开发的快速 RNA Electrophoretic Fluorescence Assay (REFA) 技术提供了检测RNA的另一种有力工具，有以下优势与特点。

1)灵敏度高：REFA使用高灵敏度的红外标记探针，并采用特技术提高检测灵敏度，使其能测定飞克摩水平的RNA（图1）。

2) 快速出结果：微奥基因的独特技术能够使分子杂交在几分钟内完成（Northern印迹需要杂交过夜），REFA测定能在2小时内完成（图2，时间安排）。

3) 操作简便：REFA在现有RNA检测方法中为最简便的操作技术。

4）操作简单与快速出结果（见操作说明书）能大大降低RNA降解。

5）分辨率高：REFA技术能够提供靶分子大小信息，能够区分RNA的单碱基突变（图5）。

6）绝对量检测：REFA测定的是单位样品体积中的RNA绝对量，不涉及任何扩增放大。

7）定量检测：REFA能够对所测定的RNA进行定量分析。

REFA所需要的试剂与条件：

1）能与靶分子配对杂交的荧光标记探针，客户可与我们联系，定制个性化探针。

2）需要能使探针与目标分子快速杂交的试剂以及用于检测miRNA的电泳系统，微奥基因的即用kit已包括所有试剂。

3）需要自备小型垂直电泳系统，并按照使用说明配制REFA专用电泳凝胶。REFA专用专用预制胶或按照说明用Kit所带试剂配置专用变性胶。

4）客户需要自备能够对IR700荧光进行图像扫描的仪器，如Li Cor公司的Odyssey 扫描仪或任何能够检测700nm荧光的成像仪。

微奥基因的REFA Kits按标签显示的温度存放，可以保存一年。