【核酸结合蛋白服务价格】

服务类别	目录号	规格	价格	描述
DNA-Prot. Pulldwon	SERV031	批（4个起步）	-	为鉴定出特异性目标蛋白，Pulldown 实验一般应包括不含结合蛋白的样品、包含结合蛋白样品，Pulldown前样品对照、无标记探针的试剂对照。建议先做EMSA看有没有结合带。
RNA-Prot. Pulldwon	SERV032	批（4个起步）	-
注：微奥基因还提供DNA-protein与RNA-protein pulldown 成套试剂盒（查看）。

   

【核酸结合蛋白鉴定技术】

A. Pulldown 鉴定： Pulldown/Pull-down鉴定核酸结合蛋白的步骤如右图所概括，大致步骤包括；

1. 制备与准备样品（样品由客户提供，样品必须含有与核酸探针特异性结合的蛋白）。

2. 制备与准备标记探针与试剂，由我公司技术组准备。

3. 样品与标记探针进行结合反应。

4. 亲和素磁珠与标记探针/蛋白复合物结合。

5. 在磁场下或通过离心使结合物与上清液分离。

6. 吸弃上清液并洗涤磁珠

7. 用SDS样品液使结合蛋白变性而与核酸探针/磁珠分离。

8. 分离液中的蛋白质用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）或双向电泳分离。

9. SDS PAGE胶用高灵敏度考马斯亮蓝（CBB）染色。

10. 对SDS PAGE胶进行脱色并摄像记录。

11. 经与客户协商后，从染色PAGE胶上切下所需蛋白带进行质谱分析，确认蛋白种类与类型。

 

B. EMSA PAGE胶结合带切胶分析

用Pulldown方法有时候会抓下来很多蛋白带。太多蛋白带会导致分析、比较困难。对于已经进行过EMSA测定，并看到明显结合的情况，可以采用直接在EMSA PAGE胶上切核酸/蛋白 结合带的方法，将切下的带汇集后进行 SDS PAGE 电泳 或做质谱分析。本方法比较直接，难点是EMSA PAGE胶上的结合带是用化学发光与荧光放大了的，其原始量在胶上是不可见的，操作十分困难。微奥基因 有专门技术与方法进行相关分析与鉴定。已经服务过不少客户（见左上例图）。