核酸结合蛋白鉴定

  

【核酸结合蛋白服务价格】

服务类别 目录号 规格 价格 描述
DNA-Prot.
Pulldwon
SERV031
批(4个起步) - 为鉴定出特异性目标蛋白,Pulldown 实验一般应包括不含结合蛋白的样品、包含结合蛋白样品,Pulldown前样品对照、无标记探针的试剂对照。建议先做EMSA看有没有结合带。
RNA-Prot.
Pulldwon
SERV032
批(4个起步) -
注:Viagene还提供DNA-protein与RNA-protein pulldown 成套试剂盒(查看)。

DNA_pulldown   

【核酸结合蛋白鉴定技术】

A. Pulldown 鉴定: Pulldown/Pull-down鉴定核酸结合蛋白的步骤如右图所概括,大致步骤包括;

1. 制备与准备样品(样品由客户提供,样品必须含有与核酸探针特异性结合的蛋白)。

2. 制备与准备标记探针与试剂,由我公司技术组准备。

3. 样品与标记探针进行结合反应。

4. 亲和素磁珠与标记探针/蛋白复合物结合。

5. 在磁场下或通过离心使结合物与上清液分离。

6. 吸弃上清液并洗涤磁珠

7. 用SDS样品液使结合蛋白变性而与核酸探针/磁珠分离。

8. 分离液中的蛋白质用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)或双向电泳分离。

9. SDS PAGE胶用高灵敏度考马斯亮蓝(CBB)染色。

10. 对SDS PAGE胶进行脱色并摄像记录。

11. 经与客户协商后,从染色PAGE胶上切下所需蛋白带进行质谱分析,确认蛋白种类与类型。

 

B. EMSA PAGE胶结合带切胶分析

用Pulldown方法有时候会抓下来很多蛋白带。太多蛋白带会导致分析、比较困难。对于已经进行过EMSA测定,并看到明显结合的情况,可以采用直接在EMSA PAGE胶上切核酸/蛋白 结合带的方法,将切下的带汇集后进行 SDS PAGE 电泳 或做质谱分析。本方法比较直接,难点是EMSA PAGE胶上的结合带是用化学发光与荧光放大了的,其原始量在胶上是不可见的,操作十分困难。Viagene 有专门技术与方法进行相关分析与鉴定。已经服务过不少客户(见左上例图)。

 

 

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