【产品包装与价格】

产品类别		目录号	规格	价格	描述
DNA	Pulldown-LM	SINP120	10次 20次	2390元 3346元	用于直接与间接DNA Pulldown，用解离液直接做质谱的实验。操作说明随Kit发货。
	Pulldown-WB	SINP121	10次 20次	2856元 3998元	用于直接与间接DNA Pulldown，用WB鉴定下拉蛋白的实验。操作说明随试剂发货。
	Pulldwon-GM	SINP122	10次 20次	3569元 4997元	适用于直接与间接DNA Pulldown，通过切Page胶染色带做质谱的实验。操作说明随试剂发货。
RNA	Pulldown-LM	SINP130	10次 20次	2856元 3998元	用于直接与间接RNA Pulldown，用解离液直接做质谱的实验。操作说明随Kit发货。
	Pulldown-WB	SINP131	10次 20次	3569元 4997元	用于直接与间接RNA Pulldown，用WB鉴定下拉蛋白的实验。操作说明随试剂发货。
	Pulldown-GM	SINP132	10次 20次	4285元 5999元	用于直接与间接RNA Pulldown，通过切Page胶染色带做质谱的实验。操作说明随试剂发货。
注：1）订货信息须包括产品类别+目录号+规格。例如订20次RNA Pulldown WB检测Kit的订货信息为；RNA Pulldown-WB，目录#SINP132，规格20次。2）微奥基因还提供各种Pulldown 技术服务，以及个性化探针设计与定制服务（查看）。

【Pulldown Kits组分比较】

	DNA/RNA Pulldown*
	解离液质谱/Pulldown-LM		WB鉴定/Pulldown-WB		PAGE带质谱/Pulldown-QM
	直接	间接	直接	间接	直接	间接
Pulldown探针*	－	－	－	－	－	－
杂交反应液**	－	option	－	option	－	option
游离探针清除柱**	－	option	－	option	－	option
杂交反应洗液**	－	option	－	option	－	option
核酸蛋白结合液	＋	＋	＋	＋	＋	＋
亲和素磁珠	＋	＋	＋	＋	＋	＋
反应促进剂	＋	＋	＋	＋	＋	＋
背景抑制剂	＋	＋	＋	＋	＋	＋
核酸蛋白洗液	＋	＋	＋	＋	＋	＋
结合解离液	＋	＋	＋	＋	＋	＋
电泳预制胶	－	－	＋	＋	＋	＋
PAGE电泳液	－	－	＋	＋	＋	＋
高敏PAGE胶染液	－	－	－	－	＋	＋
PAGE胶脱色液	－	－	－	－	＋	＋
对照标记探针	option	option	option	option	option	option
质控蛋白与探针	option	option	option	option	option	option
电泳设备与试剂	－	－	客户自备	客户自备	客户自备	客户自备
转运膜/转运液	－	－	客户自备	客户自备	－	－
特异性抗体	－	－	客户自备	客户自备	－	－
测定样品数	10/20	10/20	10/20	10/20	10/20	10/20
注：*Pulldown kits 本身不带任何探针，微奥基因提供各种标记与非标记Pulldown探针的个性化探针的设计与制作服务。此外，微奥基因有多种已经标记并测试过的Pulldown探针，有需要的请与微奥基因客客服联系。**间接法Pulldown所使用的标记探针与目标DNA/RNA杂交后，为提高检测灵敏度，有必要清除未杂交的游离标记探针。微奥基因提供包括清除游离探针的Kit（包括杂交液、清除柱与洗液），有需要的，请与微奥基因客服联系。

【产品特点】

1. 结合反应特异性高，非特异结合少。

2. SDS PAGE 染色带清晰、锐利。

3. 染色灵敏度高，可以纯化很少量的DNA结合蛋白（Pic. 3）。

4. Pulldown的蛋白适合质谱分析。

【适用范围】

1. 鉴定未知DNA/RNA结合蛋白；在一些情况下（如 Circle-RNA、lncRNA等），可能并不知道与DNA/RNA结合的有哪些蛋白、是些什么蛋白。使用本试剂盒结合质谱分析能够对未知结合蛋白进行鉴定， 不需要使用纯化蛋白或抗体。

2. 鉴定DNA结合蛋白的组份；许多转录因子都是多种蛋白的多聚体。例如NFkB有P65， P52，P50，C-rel 和Rel-B 5种亚单位。活化的NFkB为相同或不同亚单位之间的二聚体，鉴定NFkB的亚单位常用Supershift （超迁移）EMSA， 需要使用针对各种NFkB亚单位的抗体，价格不菲。使用试剂盒可以NFkB亚单位代替Supershift EMSA 对DNA-蛋白复合物的亚单位进行鉴定，不需使用任何抗体。

3. 鉴定DNA结合蛋白与其它蛋白的相互作用 ；一些转录因子与DNA的结合还需要一些不与DNA结合蛋白的参与。使用本产品能够同时对DNA结合蛋白与非DNA结合蛋白进行鉴定。

【注意事项】

1. 本试剂能够与Viagene的EMSA成套试剂无缝衔接。但如果使用Thermo， Signosis或碧云天的EMSA试剂，可能达不到理想效果或导致完全失败。其原因是因为不同厂家所用的结合反应液成分不同，不同反应液对同一种转录因子的 测定会有明显差异（Pic. 4）。

2. 使用本产品前，建议先进行常规EMSA测定。EMSA测定可以提供以下信息；

1）有没有在EMSA测定中看到DNA与蛋白的结合带。明显的EMSA结合带预示好的鉴定结果。

2）EMSA结合带的强弱提示Pulldown的反应体积；结合带强、样品核蛋白用量少，反应体系体积小。

3）如果EMSA测定中非特异条带明显，需要使用相同细胞株的阴性对照来确定纯化后的非特异带谱。

3. 请严格按照操作手册进行操作。如果遇到问题，请用生物素标记质控探针与核蛋白样品进行Pulldown 实验。生物素标记质控探针所测定的DNA结合蛋白存在于几乎所有细胞核中，Pulldown的上清液在用考马斯亮蓝染色的PAGE胶中，应会看到为蛋白带。阴性结果提示 1）样品中核蛋白降解核蛋白，2）用于pulldown的核蛋白总量不够，3）样品中的核蛋白浓度太稀，4）核蛋白在提取过程中丢失，提示需要重新制作核蛋白样品并做结 合蛋白的EMSA鉴定。

 

 

 

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  Pic. 3, 20ul、10ul、5ul、2.5 ul、1.25ul 细胞裂解液重复加入SDS PAGE胶。电泳后，凝胶板切成左右两片，分别用微奥基因与Thermo的考马斯亮蓝（CBB）染色。Pic. 4, 用链亲和素磁珠Pulldwon 的DNA结合蛋白（电泳道1-5用微奥基因 CBB染色）：1)从EMSA阳性的样品pulldown的蛋白，泳道2使用与泳道1相同细胞样品，但细胞未经过激活处理。泳道3与4，为NFkB EMSA 阳性与阴性样品的pulldown结果。结合质谱分析，能够鉴定NFkB的亚单位。5，蛋白分子Marker。6与7，样品与操作与泳道3与4相同。Pulldown蛋白经SDS-PAGE分析，用碧*天CBB染色。