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EMSA-ProC	SINP005	核蛋白浓度测定试剂盒（操作说明）。	100ml	260

    

一、EMSA对样品用量的要求。

做EMSA要求样品中有天然的，有活性，可检测量的完整DNA/RNA结合蛋白（结合蛋白），还需要样品上样准确。只有所有的样品所用的总蛋白量相同的情况下，各个样品中的核酸结合蛋白的量与活性才有可比性。遗憾的是，我们接触到的许多客户，所测定的核蛋白浓度都有些问题。

二、核蛋白浓度测定常见问题

1. 蛋白标准曲线的范围太高。一般测定WB样品浓度的标准曲线范围一般在5-40hg/ul，因为用于WB的样品的蛋白浓度一般都在15ug/ul以上。但制定同样测定范围的标准曲线来确定核蛋白浓度会造成很大误差，因为EMSA核蛋白浓度一般在1-2.5ug/ul之间。由于核蛋白浓度低，稍微的误差就会导致核酸结合蛋白成倍的差别。

2. 核蛋白提取试剂干扰BCA测定的化学剂如EGTA，还原剂等。这些干扰剂会在没有蛋白的情况下仍然产生明显的OD读数，造成蛋白浓度虚高。许多厂家包括碧云天的试剂盒都已经注明了EGTA会干扰BCA的蛋白测定，无视这些警示只会使蛋白浓度虚高，可能导致EMSA失败。

3. 一些核蛋白提取试剂及操作方法很容易造成胞浆蛋白污染。由于胞浆蛋白浓度比核蛋白高几十倍，稍微的胞浆污染就可致测定浓度高，但核蛋白/结合蛋白占比大大减少。

4. 相比Bradford法，Lowry法与Folin酚法，BCA法的灵敏度高，重复性好（中国生化药物杂志，2008 29（4）：277），比较适合做核蛋白浓度测定，但需要排除核蛋白提取试剂中的干扰物。

 

微奥基因的BCA蛋白浓度测定改良试剂主要用于测定EMSA核蛋白浓度，与核蛋白提取试剂配合使用，可排除EGTA，还原剂等的干扰，可获得可靠的测定结果。客户可以将微奥基因蛋白测定说明书（查看）与别家试剂盒进行比较，应当可以看出一些差别。