一、产品简介:

细胞核和细胞浆目前成为研究细胞组分的两个热点，获得高浓度的细胞核蛋白和细胞浆蛋白成为得到好的研究结果的重要实验过程。 本试剂盒主要原理是在低渗透压条件下，使细胞充分膨胀，然后破坏细胞膜，释放出细胞浆蛋白，离心得到细胞核沉淀。最后通过高盐的细胞核蛋白抽提试剂抽提得到细胞核蛋白。本试剂盒是本公司非放射性EMSA试剂盒（cat; SIDET001, SIDET003, SIDET004, SIDET006, SIDET007）实验成功的重要部分，经BCA测定24cm2贴壁细胞（或50ml规格培养瓶养的悬浮细胞）抽提物，核蛋白浓度约为1.2－3.0ug/ul.。抽提得到的样品为非变性的天然核蛋白可以用于EMSA，Footprinting，报告基因检测以及酶活力测定，加SDS样品液后可用于WB等分析。本试剂盒足够进行50个样品的核蛋白抽提。

二、细胞核蛋白抽提步骤：

1. 贴壁细胞胞浆蛋白—核蛋白制备：

（1）将50ml规格的细胞培养物（细胞生长面积约24cm2）置于冰盒上低温操作。
（2）   弃培养瓶中上清培养液，加3ml 预冷1×PBS于细胞培养瓶中漂洗细胞3次。
（3）   取1.0ml胞浆蛋白裂解液I漂洗细胞一次，弃漂洗后的缓冲液。
（4）   取1.0ml胞浆蛋白裂解液II于培养瓶中溶解细胞，可用1.0ml移液枪贴壁吹打细胞多次,可以在显微镜下观察细胞的裂解情况。
（5）    尽量吸干净培养瓶中的裂解液，转入1.5ml离心管中，4℃，14,000 rpm 离心5min。
（6）    用移液器分开上清和沉淀，上清液即为胞浆蛋白液，请于-80℃保存。
（7）    取0.5ml胞浆蛋白裂解液I漂洗沉淀一次，4℃，14,000 rpm 离心5min，弃上清。
（8）    取50ul 核裂解液（根据沉淀量可酌情增减）重悬沉淀，4℃，静置离心管30min，并间隔剧烈震动重悬沉淀。同时调离心机冷却至4℃。
（9）    4℃，14,000rpm 离心 20min。

2. 悬浮细胞胞浆蛋白—核蛋白制备：(查看相应说明书）