肿瘤分子NEFA对照


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癌症一直以来都是医学难题,近年来抗癌新药进展不断,从靶向药到单抗(也就是免疫治疗)以及各种联合用药,分子诊断在癌症分型、靶向药选择、癌症筛查及预防上发挥越来越重要作用。

在癌症分子诊断领域,近年来,我国的分子诊断技术已广泛运用于肿瘤治疗的各个阶段,对于肿瘤早筛、分型确认、靶向药物选择、疗效监测、复发监控起到重要作用,改善了过去确诊的癌症患者多为晚期以及个体化治疗方案缺失导致的治愈率不高的问题。未来随着越来越多的人开始关注疾病预防,分子诊断有望普遍应用于人群健康筛查与体检、重大疾病预警与诊断、公众分子基因档案建立等疾病预防和早期筛查等领域。

分子诊断的代表技术有PCR(普通PCR、荧光PCR、数字PCR等)基因测序、FISH(染色体原位杂交)、基因芯片。其中荧光 PCR (包括多重 PCR、ARMS PCR 和实时荧光定量 PCR)市场发展较为成熟,技术平台为开放式系统,国产荧光 PCR 仪器已逐步实现进口替代,如达安基因、致善生物、凯普生物、安必平等均从事荧光PCR仪器的研发生产,如今国内三级医院的荧光 PCR 仪器装机量已接近饱和,试剂厂商依靠配套提供仪器带动其试剂销售的红利期已然褪去;与此同时最先进的数字 PCR 技术(也称为第三代 PCR)已实现了定量分析,大幅提升检测精度,成为未来的发展方向。

但PCR、FISH、基因芯片技术在分辨单核苷酸突变或基因变异方面的分辨不理想,并且还受假阳性与阴性困扰。对于许多癌症细胞出现的单碱基突变,不得不提供基因测序解决。目前已有了一代、二代与三代基因测序技术,其中第二代测序技术,因其革命性的进步,而被成为“下一代”基因测序(NGS),而三代测序还没有实现产业化。

由于癌症患者可能产生靶向药耐药问题,需要时常检测相关基因的单核苷酸突变。但由于基因测序的费用相对较高,检测周期较长,现在对肿瘤细胞(如非小细胞型肺癌)因基因突变产生的耐药主要还是靠影像学筛选:有影像学异常,才考虑基因测序。市场对能快速检测单碱基突变的技术有迫切需求,毕竟,为确定单碱基突变而做全细胞基因测序有些夸张。

微奥基因(viagene)开发了快速确定单碱基突变的技术,测定能够在1-2小时完成,费用,检测成本仅为二代测序的1/20。所包括的技术包括两方面:

1)电泳法(NEFA技术)。用于确定癌症相关DNA/或RNA的单碱基突变。凝胶电泳不但能提供目标分子大小的信息,而且能区分单碱基突变,操作简单,大概2小时左右可以出结果。现有产品灵敏度为pM水平,可以做到fM甚至单个靶分子水平。此外,NEFA还解决了分子杂交问题:常规电泳技术需要分子杂交过夜,但NEFA能够使分子杂交在几分钟完成。

2)侧流层析试纸法(NLFA)。NLFA具有与电泳法相同的快速杂交与高灵敏度的特点,但出结果更快。但试纸法不能够像电泳法那样显示目标分子大小,因而对所呈现的结果是否是特异性检测有一定不确定性。微奥基因的解决方案是NLFA必须有三种特异性杂交才能呈现结果,非特异反应基本可以完全排除。

微奥基因目前只出售几种用于科研的,针对非小细胞肺癌的常见突变的NEFA Kits。

微奥基因需求合作伙伴,开发临床肿瘤分子诊断产品。

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