EMSA-NFkB

  

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1. 非放射性EMSA的种类与相关产品 - 见EMSA产品目录

2.  Viagene非放射性 EMSA产品信息:

Viagene拥有多项关于EMSA的独特技术。非放射性EMSA及其相关产品是Viagene在全球推出的很成熟的产品之一。EMSA产品特性;

Viagene的EMSA成套试剂包括探针、转运膜、化学发光底物等所有试剂,到货后即可以进行EMSA测定。客户不需要花时间合成与标记探针或购买其它试剂。
Viagene出售的所有EMSA产品都经过测试,保证出结果。

Viagene出售针对特异性TF的EMSA成套试剂的测定条件都经过优化。我们要求用户按照步骤操作,不要改变如何条件。用户不需要 花时间自己摸索实验条件,出了问题也容易找出原因。
Viagene有专人负责EMSA产品配置并经过检测,出错的可能很小。
Viagene唯一一家具有各种针对特定TF的阴性与阳性对照。是我们有条件进行实际EMSA测试。
由于每种产品都做过实验测定,测定条件也已经确定,用户不需要 花时间自己摸索实验条件。
有中文与英文操作手册供用户选择。
 
EMSA技术支持
尽管注意到了以上的问题,有时候还是没有拿到理想的结果。对于可能出现的问题,用户需要能够发现问题,找出解决办法。如何客户愿意找我们共同分析,我们也会通过力所能及的帮助。现在使用我们的产品与服务单位比较多。许多出现问题的用户,在我们的帮助下,都拿到了理想结果,许多并已经发表了文章。相信 陆续会有许多文章发表。
我们能够回答有关EMSA实验的所有问题。欢迎来电与我们洽询 。
我们的技术人员对EMSA非常熟悉,知道怎么分析结果,能够解决EMSA测定中的有关的问题。
如果你在北京或上海,我们的专家可以上门通过协助用户的实验。
我们提供EMSA技术服务以展示Viagene对所开发的EMSA技术的信心。
 
用户的反馈
网上可以查到买其它公司的EMSA产品 做不出结果的求助信息,但基本查不到用Viagene产品做不出结果的记录 。
使用Viagene产品与服务的客户满意度为99%以上。

Viagene公司的客户很多, 我们在此列出了一部分。欢迎客户来电了解更多情况。

已有200多篇文章发表(查看)。 

◊ NF-кB EMSA Kit [Cat# TFDET001]

4-1,非放射性NF-kB试剂盒[目录号:TFDET001]

NF-kB最初被鉴定为在B细胞中和免疫球蛋白k轻链的增强子结合。但随后在非B-细胞的细胞质中被发现,形成NF-kB和IkB的复合物。最初在DNA结合蛋白复合物中分离的NF-kB是由p65(RelA)和p50构成的异源双聚体。其他分离的单体包括p49(也可称为p52),p75(c-Rel),p68(RelB)。p65,p68,p75单体起反式激活作用。 p50,p49(p52)单体具有DNA结合活力,但只具有微量的反式激活作用。据报道p49和NF-kB的单体p65形成具有转录活力的异源双体,类似于p50/ p65异源双体。p49/ p65和p50/ p65异源双体在细胞质中受一种叫IkBa/MAD-3的抑制剂调节。IkB和p65单体结合,阻制了细胞核中的定位和DNA的结合。 在体外高浓度的p65能形成同源双聚体,能和DNA微弱地结合。Poly(dI:dC)能抑制这一反应(14)。p49和p50也能形成同源双聚体,但在细胞中的浓度很低。NFkB NF-kB

通常,在作NF-kB的凝胶迁移实验时,在20ul的反应体积中,有溶于10 mM HEPES的0.28pmoles 的NF-kB9寡核苷酸(pH7.9), 50mMKCl, 0.2mMEDTA, 2.5mM DTT, 10%甘油, 0.05%NP-40。 当用纯化的蛋白时,250-300ng足以形成凝胶迁移复合物,而需用10ug的HeLa细胞核抽提物。凝胶迁移复合物在室温中保温30分钟,在50mMTris(pH8.3)和38mM甘氨酸的7%聚丙烯酰胺凝胶电泳中分离凝胶迁移复合物。含考马斯兰和二甲苯蓝色素的加样溶液只能加入到阴性对照反应中,因这两种色素会加剧NF-kB复合物的解离。 当用HeLa细胞核抽提物作为结合蛋白来源时,可形成两种序列特异的凝胶迁移复合物,即p50/p50同源双聚体和p50/ p65异源双聚体。在表达p49,p50,p65的细胞中,可检测到4个序列特异的凝胶迁移复合物(p49/ p49,p50/ p50,p50/ p65,p49/ p65),如果存在高浓度的p65,可检测到微量的p65/p65。 下列试剂可加强NF-kB在体外的结合:mM级的GTP,ATP,精胺,亚精胺,钡或钙离子,ng级的Co3+(NH3)6。

参考资料:
Urban M B et al 1991 EMBO J 10(7), 1817
Baeuerle P A 1991 Biochim Biophys Acta 1071, 63

4-2,非放射性STAT5试剂盒[目录号:TFDET004]

4-2,非放射性STAT5试剂盒[目录号:TFDET004]

STAT(Signal Transducer and Activator of Transcription)5 - 信号转导和转录激活因子5,属STAT蛋白家族,是一种tyrosine磷酸化转录因子,羧基端少数氨基酸序列不同。有STAT5A和STAT5B两种亚型,具有95%的同源性。

STAT5的活化与肿瘤的发生关系密切,有文献报道ALL(急性淋巴细胞白血病)、AML(急性髓细胞白血病)等白血病有JAKs,Stat1、3、5的活化,ALL以Stat5活化为主,在Stat5活化的AML病例中,有部分只有STAT5B活化而无Stat5A活化。另外,在各种人固体瘤和血液恶性瘤中,STAT蛋白(尤其是STAT3和STAT5)经常被过度活化。持续的STAT3和STAT5信号系统连续的反调控核基因的表达,促进了肿瘤细胞的生长和生存,常常导致恶性肿瘤的发生。因此,可将STAT蛋白家族做为肿瘤治疗的理想靶点,研究它们参与整个肿瘤细胞生长过程的调控机制,分析它们在细胞中的活化和抑制过程,为肿瘤的治疗提供新思路。

STAT5在细胞中的信号转导主要通过JAK(JAK酪氨酸蛋白激酶)/STATs信号途径完成,STAT5通常位于胞浆中。当细胞因子与相应受体结合,激活与受体相联的JAK激酶磷酸化(免疫沉淀法实验证实在用GM-CSF处理后仅JAK2的酪氨酸被磷酸化)。磷酸化的JAK激酶使STAT5单体磷酸化,被磷酸化的STAT5单体与受体分离并与已经活化的其他STATs蛋白形成同源或异源二聚体,二聚体转移到细胞核与相应的DNA结合并激活转录。从激活酶动力学角度讲,STAT5被细胞因子激活后用STAT5抗体可检测到2个条带,上方一条是与细胞因子刺激无关的组成性酪氨酸磷酸化,下面一条被激活的是STAT5B,在1 min内被磷酸化,并随蛋白质的磷酸化的不同而迁移。有实验表明STAT5A比STAT5B更易于激活。

参考资料:

  1. Imada K,Leonard W J.The JAK-STAT pathway, J. Mol Immunol, 2000, 37:1-11

    Magrassi L,De Fraja C,Conti L,et al.Expression of the JAK and STAT superfamilies in human meningiomas, J. Neurosurg, 1999,91:440-446.

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